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实验七：DNA的粗提取
一、实验原理
1.入研磨液研磨，在变性剂SDS作用下破裂，释放出内容物—DNA。
2.DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，可以将DNA与蛋白质进行分离，进一步提取含杂质较少的DNA。
3.DNA分子中的脱氧戊糖基，在酸性溶液中变成ω-羟基-γ酮基戊醛，与二苯胺试剂（沸水浴）作用生成蓝色化合物，溶液呈现淡蓝色。
二、实验目的与要求
1.了解DNA粗提取的原理。
2. 学会DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。
3. 通过本实验培养实验操作能力和观察能力。
三、实验材料与用具
（一）实验材料：菜花、香蕉
（二）实验器材与用具：研磨过滤器，试管5支，试管夹2支，试管架1个，小刀，称量纸，玻璃棒，移液器及吸头，水浴锅
（三）实验试剂：研磨液，预冷95%乙醇，2 mol/L NaCl溶液，二苯胺试剂
二苯胺试剂的配制：试剂盒中二苯胺试剂A（本溶液为强酸溶液，请勿滴在皮肤和衣物上)和二苯胺试剂B要现用现混。使用时将试剂盒中二苯胺试剂B全部取出加入到A中混匀。
四、实验步骤
（一）DNA粗提取：
1、用小刀切取菜花顶部花5g（用小刀切取香蕉块5 g），放入研磨过滤器外套筒内，用移液器加入1.5 mL的研磨液，插入研磨杆，充分研磨5~8 min。
2、取打开研磨杆上盖，用移液器吸取研磨过滤液（约1 mL）分别缓缓加入到2支含有3 mL预冷95%乙醇的试管中，已对应标记香蕉和菜花，此时可见有白色丝状（或絮状物）析出，即为得到的DNA粗提物。
（二）DNA的鉴定：
1、取3支试管，分别标记空白、香蕉和菜花，均加入2 mL，2 mol/L NaCl溶液。用玻璃棒小心挑出白色丝（絮）状物，分别加入到对应试管中，搅拌促使DNA溶解。
2、再分别向试管中加入2 mL二苯胺试剂，混匀，观察混合液颜色。
3、将3支试管放入沸水浴中加热10~15 min，加热过程中 观察试管中溶液的颜色变化。
五、实验结果与分析
实验结果如图1所示，菜花DNA提取物用二苯胺试剂鉴定时，呈现海蓝色，而香蕉的DNA鉴定呈现蓝绿色，对照组则未发生颜色变化，说明利用菜花和香蕉作为实验材料，均提取到DNA的粗提物。
由于二苯胺试剂在沸水浴中使DNA中的嘌呤核苷酸中的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ-酮基戊醛呈现蓝色，因此说明菜花和香蕉的提取物即为DNA的粗提物。