实验八：叶绿体中色素的提取与分离

3.体中的色素组成

三、材料与用具

1.实验材料：干菠菜叶 0.5g

2.实验用具：研磨过滤器，干燥定性滤纸，剪刀，直尺，铅笔，烧杯，毛细吸管，量筒，电子天平。

无水乙醇，改良层析液（由20份在60-90℃下分馏出来的石油醚、2份丙酮和1份甲苯混合而成），二氧化硅和碳酸钙。

四、实验步骤

研磨法：材料剪碎加入有机溶剂（无水乙醇）    研磨过滤器研磨、匀浆     提取液     层析液分离色素

实验方法过程

（1）绿叶中的色素

①电子天平秤取0.5g剪碎干菠菜叶，放入研磨过滤器中。

②向研磨过滤器中放入少许二氧化硅和碳酸钙，再加入3ml无水乙醇，进行迅速、充分的研磨。

注：二氧化硅有助于研磨的充分，碳酸钙可防止研磨中色素被破坏。

③收集到的滤液在研磨过滤器的研磨杆中。

（2）制备滤纸条

将干燥的定性滤纸剪成长为10cm，宽为1cm的滤纸条，并将滤纸条的一段减去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。

（3）画滤液细线

用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀的画出一条细线。待滤液干后，重复画4-5次。

（4）分离绿叶中的色素

将适量的层析液倒入烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）轻轻插入层析液中，随后用纸张盖紧烧杯口。注意，不能让滤液细线触及层析液。

（5）观察与记录

观察烧杯内滤纸条上出现了几条色素带，以及每条色素带的颜色。将观察结果记录下来。

五、实验结果

结果如图1所示，对比普通层析液（图2）只能分辨出三条色素带，改改良层析液实验中，滤纸条上明显出现四条宽度、颜色不同的彩带，从上到下依次为橙黄色的胡萝卜素、黄色的叶黄素、蓝绿色叶绿素a和蓝绿色叶绿素b。

六、讨论

1. 观察滤纸条上出现了几条不同颜色的色素带？其排序怎样？宽窄如何？这说明了什么？

答：实验中科清晰的看到滤纸条上出现4条不同颜色的色素带，从上到下橙黄色的胡萝卜素、黄色的叶黄素、蓝绿色叶绿素a和蓝绿色叶绿素b，其中，胡萝卜素 窄，叶绿素a 宽，说明叶绿体色素中叶绿素a含量 多，而胡萝卜素含量 少。

2. 滤纸条上的滤液细线，为什么不能触及层析液？

答：滤液细线为叶绿素提取液所画，如果触及到层析液，会溶解在层析液中，进而分不出几种色素条带，导致实验失败。

【注意事项】

（1）为使研磨过程比较充分，以及保护色素不被破坏，应加入SiO2和CaCO3。

（2）画滤液线时，尽量画直、画细、画浓，每次画完要等滤液干后再重新画，以防滤液扩散开使滤液线过宽，影响实验结果。

（3）为避免过多的吸入层析液中的挥发性物质，本实验应在通风条件下进行，实验结束时及时用肥皂洗手。